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- 作者:小编
- 发布时间:2025-11-19 12:12:02
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黄花石蒜球茎经匀浆、浸取、硫酸铵分级沉淀、阴离子交换柱DEAESEPHAROSE和SEPHACRYLS200分子筛层析得到经SDSPAGE检测为单一蛋白带的黄花石蒜凝集素LYCORISCHINENSISAGGLUTININ,LCA纯品。经SEPHACRYLS200凝胶过滤和SDSPAGE测得其表观分子量为48KD,亚基分子量为12KD,表明LCA是由四个相同亚基组成的蛋白。LCA只凝集兔血细胞,其凝集兔血细胞效价为095UG/ML,但是对鸡血及人A、B、AB、O型血均不凝集。其凝血活性部分依赖于金属离子CA2、MG2。糖抑制实验结果表明,甘露聚糖是LCA的专一性抑制糖,其次是甘露糖。研究了不同温度、PH和变性剂对LCA凝血活性和荧光光谱的变化,当温度达80℃以上时,活性开始下降,100℃处理20分钟,LCA仍保留60%活性;PH为412对活性的影响不大,PH为2时,完全丧失活性;温度的升高和PH的改变对荧光光谱影响不大。表明LCA对热,酸碱具有较强的耐受性。用荧光光谱法研究了三种变性剂脲、盐酸胍、SDS在不同浓度下构象的变化和凝血活性的变化情况。NBS修饰TRP过程中,荧光强度明显降低,最大发射波长开始并没有明显变化,随着TRP不断被修饰,发射峰明显蓝移。丙稀酰胺对LCA中TRP淬灭程度达到100%,KI能淬灭629%的TRP荧光,而CSCL几乎没有淬灭作用。甘露聚糖是LCA专一性抑制糖,同时作为一种淬灭剂能淬灭833%的TRP残基的内源荧光。
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